顯微鏡觀察血液(人血涂片的制作)

血涂片的顯微檢查是血液細胞學(xué)檢查的基本方法，臨床上應(yīng)用極為廣泛，制備厚薄適宜，分布均勻，染色良好的血涂片是血液學(xué)檢查的重要基本技術(shù)之一。
涂片法制片是生物顯微制片的基本方法之一。

取血步驟：
可分5個步驟進行
消毒→取血→推片→染色→觀察

消毒與取血

消毒
先按摩取血部位，使血流通暢；再用酒精消毒采血針和取血部位（如指尖）。

待酒精干后，刺破皮膚，使血自然流出，勿擠。取干凈載片，讓血滴在離載片一端中4～5毫米處，注意手指持握載片的邊緣，勿觸及其表面。不能使載片接觸取血部位的皮膚。

推片
取一塊邊緣光滑的載片做推片。將其一端置于血滴前方，向后移動到接觸血滴，使血液均勻分散在推片與載片的接觸處。然后使推片與載片呈30°～40°角，向另一端平穩(wěn)地推出，如右圖所示。涂片推好后，迅速在空氣中搖，使之自然干燥。

染色
用特種玻璃鉛筆在血膜兩側(cè)畫兩條線，防止染液外溢。再將瑞氏染液(伊紅-亞甲基藍)滴在血膜上，至染液淹沒全部血膜，染半分鐘。加等量蒸餾水(或緩沖液)與染液混合再染5分鐘。最后用蒸餾水把染液沖掉，用吸水紙吸干，自然干燥后，即可觀察。

觀察
紅細胞

淡紅色，無核的圓形細胞，因紅細胞為雙凹形，故邊緣部分染色較深，中心較淺，直徑7-8微米。
顆粒白細胞
嗜中性顆粒白細胞：體積略大于紅細胞，細胞核被染成紫色分葉狀，可分1-5葉。直徑10-12微米。
嗜酸性顆粒白細胞：略大于嗜中性白細胞，細胞核染成紫色，通常為2葉，胞質(zhì)充滿嗜酸性大圓顆粒，被染成鮮紅色。直徑10-15微米。
嗜堿性顆粒白細胞：體積略小于嗜酸性白細胞，細胞質(zhì)中有大小不等被染成紫色的顆粒，顆粒數(shù)目較嗜酸性白細胞的顆粒少，核1-2葉，染成淡藍色。直徑10-11微米。

無顆粒白細胞
淋巴細胞：可觀察到中、小型兩種。小淋巴細胞與紅細胞大小相似，圓形，核致密，染成深紫色。周圍僅一薄層嗜堿性染成淡藍的細胞質(zhì)。中淋巴細胞較大，核圓形。直徑6-8微米。
單核細胞：體積最大，細胞圓形。胞質(zhì)染成灰藍色。核呈腎形或馬蹄形，染色略淺于淋巴細胞的核。直徑14-20微米。
血小板
血小板為不規(guī)則小體，直徑2 - 3微米。其周圍部分淺藍色，中央有細小的紫紅色顆粒，聚集成群。

注意事項
玻片的清洗：新玻片常有游離堿質(zhì),因此應(yīng)用清洗液或10%鹽酸浸泡24h,然后再徹底清洗。用過的玻片可放入適量肥皂水或合成洗滌劑的清水中煮沸20min,再用熱水將肥皂和血膜洗去,用自來水反復(fù)沖洗,必要時再置95%乙醇中浸泡1h,然后擦干或烤干備用。
使用玻片時只能手持玻片邊緣,切勿觸及玻片表面,以保持玻片清潔,干燥,中性、無油膩。
一張良好的血片,要求厚薄適宜,頭體尾分明,分布均勻,邊緣整齊, 兩側(cè)留有空隙。血片制好后最好立即固定染色,以免細胞溶解和發(fā)生退行性變。
血膜未干透,細胞尚未牢固附在玻片上,在染色過程中容易脫落, 因此血膜必需充分干燥。

生物顯微鏡

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