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什么是單分子技術(shù)

單分子技術(shù)簡介
單分子技術(shù)的特色在于個別分子的觀察。舉例來說,在傳統(tǒng)分生實驗中,觀察濃度1 mM的樣品,1 ml的反應(yīng)體積中就有多達1012個分子,所以得到的,是多個分子均值的觀察結(jié)果。事實上,每個分子的表現(xiàn)都有所差異,尤其在一些快速的反應(yīng)步驟或微小族群的表現(xiàn),而這些差異,若是透過傳統(tǒng)分生技術(shù)觀察就會被掩蓋。另外,更重要的是,單分子技術(shù)可以“操縱”分子。舉例來說,依條件所需對分子施加不同的作用力,在不同的受力下分子會表現(xiàn)出不同的特質(zhì)。利用這樣的方式,可以觀察到分子更多細微的表現(xiàn)。

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圖解:光鉗實驗設(shè)計示意圖:黑色線條的RNA分子,固定于兩顆奈米珠之間,奈米珠分別由微管及雷射固定。實驗過程移動雷射位置改變兩奈米珠間的距離,進而拉扯RNA的結(jié)構(gòu)。
單分子技術(shù)在實驗方法上可以分為兩大類:一種是對分子施加外力,像是光鉗、磁鉗和原子力顯微鏡。其中光鉗的做法,是利用磁珠分別修飾于待測分子之上,再以雷射光去移動兩磁珠間的位置,磁珠距離的改變,進而拉扯分子達到施力的效果;另一種是利用螢光標(biāo)記待測分子使其發(fā)光成像,此種種類較多,包括共軛焦顯微鏡、全反射螢光顯微鏡螢光共振能量轉(zhuǎn)移技術(shù)等等。
單分子技術(shù)目前已被廣泛應(yīng)用在生命科學(xué)領(lǐng)域,像是在蛋白質(zhì)表現(xiàn)和分子間交互作用的相關(guān)研究,都可發(fā)現(xiàn)其身影。而依照應(yīng)用的對象,單分子技術(shù)可以大致分為兩類:第一類是馬達蛋白的移動和行為表現(xiàn)。例如,核醣核酸聚合酶利用核苷酸生成核酸,解旋酶解開雙股DNA,細胞骨架的行為等等。第二類是觀察蛋白質(zhì)和核酸二三級結(jié)構(gòu)的摺疊情形。另外,單分子技術(shù)也可以結(jié)合傳統(tǒng)的分生技術(shù),進一步得到更多的資訊。

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